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分子(zi)平臺推(tui)薦(jian)規劃


1. 分子生物實(shi)驗(yan)室(shi)設計要求(qiu)

分子生物(wu)實驗(yan)室并沒有嚴格(ge)的(de)(de)凈化等(deng)級(ji)要求(qiu),但是為(wei)避免各(ge)個實驗(yan)區域間交叉污染的(de)(de)可能性,宜采(cai)用全送全排的(de)(de)氣流組織形式。同時(shi),要嚴格(ge)控制(zhi)送、排風(feng)的(de)(de)比例以(yi)保證各(ge)實驗(yan)區的(de)(de)壓(ya)力要求(qiu)。

(1)試劑貯存(cun)和準(zhun)備區

  該實驗區主要進行的(de)操作為貯(zhu)存試(shi)劑的(de)制備、試(shi)劑的(de)分裝和主反(fan)應混合液的(de)制備。試(shi)劑和用于樣品制作的(de)材料(liao)應直接運(yun)送至該區,不(bu)得經過其他區域。試(shi)劑原材料(liao)必須貯(zhu)存在本區內,并在本區內制備成所需的(de)貯(zhu)存試(shi)劑。對(dui)與氣流壓力的(de)控制,本區應對(dui)外界保持微正壓。

(2)標本制備區

  該區(qu)域主(zhu)要進行的(de)操作為(wei)樣本的(de)保存、核(he)酸(RNA、DNA)提取、貯(zhu)存及其加(jia)入至(zhi)擴增反應管和(he)測定(ding)DNA的(de)合(he)成。本區(qu)的(de)壓力梯度(du)要求為:相對(dui)于鄰近區(qu)域(yu)為正壓,以避(bi)免從(cong)鄰近區(qu)進入本區(qu)的(de)氣(qi)(qi)溶(rong)膠(jiao)污(wu)染。另外,由于在(zai)加(jia)樣操作中可能會發生氣(qi)(qi)溶(rong)膠(jiao)所致的(de)污(wu)染,所以應避(bi)免在(zai)本區(qu)內(nei)不必要的(de)走動(dong)。

(3)PCR擴增(zeng)區

該區(qu)域主要(yao)進行的操作(zuo)為DNA擴增(zeng)和擴增(zeng)片段的(de)(de)測(ce)定。此外,已制備(bei)(bei)的(de)(de)DNA模板(來自(zi)樣本(ben)制備(bei)(bei)區(qu)(qu))的(de)(de)加入和主反應混(hun)合液(來自(zi)試劑貯(zhu)存和制備(bei)(bei)區(qu)(qu))制備(bei)(bei)成(cheng)反應混(hun)合液等也可在本(ben)區(qu)(qu)內(nei)進(jin)(jin)行(xing)(xing)。本(ben)區(qu)(qu)的(de)(de)壓力梯(ti)度要求為(wei):相對于(yu)鄰近區(qu)(qu)域為(wei)負壓,以避免氣溶膠從本(ben)區(qu)(qu)漏出。為(wei)避免氣溶膠所(suo)致的(de)(de)污染,應盡量(liang)減少在本(ben)區(qu)(qu)內(nei)的(de)(de)不必要的(de)(de)走動。個(ge)別操(cao)作如加樣等應在超凈臺內(nei)進(jin)(jin)行(xing)(xing)。

(4)PCR產(chan)物分析(xi)區(qu),該(gai)區(qu)域主要(yao)(yao)用(yong)于PCR產(chan)物的電泳、成像及分析(xi),也可以兼容下(xia)游測序(xu)、雜交等實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)。本(ben)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)區(qu)內(nei)樣本(ben)主要(yao)(yao)為(wei)高濃度(du)PCR產(chan)物,氣溶膠濃度(du)極高,污染風險最(zui)大,應嚴格保持負(fu)壓,并且獨立(li)通(tong)風。本(ben)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)所有實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)器具及人員(yuan)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)服需要(yao)(yao)與其他實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)保持隔離,任(ren)何相關(guan)物品只進不出,實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)中(zhong)廢料也應當封存(cun)送(song)出丟棄或清洗(xi)。為(wei)配合電泳需求,該(gai)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)必須配有獨立(li)水源(yuan)及水槽。

2. 分(fen)子(zi)生物實驗(yan)室設計圖范例

(1)常規(gui)4區PCR實驗室設計方案可見下圖:

圖片1.png


該方案可(ke)以簡化為三間,將產物分析(xi)區取消,并在遠離此區域的另一件(jian)非分子生物實(shi)驗室中進行(xing)產物分析(xi)實(shi)驗。

(2)在(zai)實驗室分布條件不適(shi)合(he)建立PCR實驗室的時候,可以嘗試將已有潔凈實驗室作為試劑準備區,已有開放實驗室作為樣本制備區和PCR擴增區,并將遠離這兩個區域的有水槽和水源的非核酸實驗室內安放電泳、成像等產物分析設備。

(3)在實驗(yan)(yan)室空(kong)間不富(fu)足的情況下(xia)也可(ke)以通過(guo)分割空(kong)間的方(fang)式以單(dan)間實驗(yan)(yan)室建立分子生(sheng)物實驗(yan)(yan)室,并(bing)同樣在遠離(li)此區域(yu)的另一(yi)件非分子生(sheng)物實驗(yan)(yan)室中進行產物分析實驗(yan)(yan)。參(can)考方(fang)案可(ke)見下(xia)圖:


單(dan)間實驗室(shi)分割方(fang)案1:

圖片2.png



單間(jian)實驗室分割方案2:


圖片3.png




四、分子平臺推薦設備配置


儀器設備名稱(cheng)

數(shu)量

放置區域(yu)

冰箱

1

試劑準(zhun)備(bei)區

渦旋混勻儀(yi)

1

試劑(ji)準備區

臺(tai)式離心機

1

樣本(ben)制備(bei)區

掌上離心(xin)機

1

試劑準備區

紫外線(xian)消毒車

1

試劑準備(bei)區

潔(jie)凈工作(zuo)臺

1

試劑準備區

移液器

1

試劑(ji)準(zhun)備(bei)區

移液器

1

試劑準備區

移液(ye)器

1

樣本制備區(qu)

移(yi)液器

1

試劑(ji)準備區

移液器

1

試劑準備(bei)區(qu)

紫外線消(xiao)毒車

1

樣本制備區

臺式離心機

1

樣本(ben)制備(bei)區

掌上(shang)離心機

1

樣本制(zhi)備區

勻漿儀

1

樣本制(zhi)備區

總核(he)酸OD濃(nong)度測(ce)定

1

樣本(ben)制(zhi)備區

冰箱(xiang)

1

樣本(ben)制備(bei)區

生(sheng)物安全柜

1

樣本(ben)制(zhi)備(bei)區

渦旋混勻儀

1

樣本(ben)制備(bei)區

PCR板(ban)封膜儀

1

樣本制備區(qu)

96孔板(ban)離心機(可選)

1

樣本制備區

核酸(suan)提取儀(可選)

1

樣本制備區

金屬浴

1

樣本制備區

水浴鍋

1

樣本制備區

移液器

1

樣本制備區

移(yi)液器

1

樣本(ben)制(zhi)備區

移液器(qi)

1

樣本(ben)制備區

移液(ye)器

1

樣本制備區

移液器(qi)

1

樣本制(zhi)備區

熒光定量PCR儀

1

PCR擴增區

普通PCR儀(yi)器

1

PCR擴增區

紫外線消毒(du)車

1

PCR擴增(zeng)區

移(yi)液器

1

PCR擴增(zeng)區

移液器

1

PCR擴增區(qu)

移液器

1

PCR擴增區

移液器

1

PCR擴增區

凝膠成像儀

1

產物分析區

電(dian)泳儀

1

產物分析區

電泳(yong)槽

1

產物分析區

脫(tuo)色搖(yao)床(可選(xuan))

1

產物分析(xi)區(qu)

微波(bo)爐

1

產物分析區

電子天平

1

產物分析區

移液器

1

產物分析(xi)區

移液(ye)器

1

產物分析區

紫外線消毒(du)車

1

產物分(fen)析(xi)區

超純水


試劑準(zhun)備(bei)區&樣(yang)本制備(bei)區

PCR試劑盒


試(shi)劑準備區

PCR預(yu)混(hun)液(ye)


試劑準備(bei)區

96孔PCR板


試劑準(zhun)備區(qu)

96孔板透明膜


試(shi)劑準備(bei)區(qu)

八聯管和(he)管蓋


試劑準備區

各式槍頭(tou)


試(shi)劑準備區&樣本制(zhi)備區&產物(wu)分析區

電泳(yong)專用槍頭(可選)


產物分析(xi)區(qu)

EP管(guan)


試劑準備區&樣(yang)本(ben)制備區

冰盒


試劑準備區(qu)&樣本制備區(qu)