1. 分子生物實(shi)驗(yan)室(shi)設計要求(qiu)
分子生物(wu)實驗(yan)室并沒有嚴格(ge)的(de)(de)凈化等(deng)級(ji)要求(qiu),但是為(wei)避免各(ge)個實驗(yan)區域間交叉污染的(de)(de)可能性,宜采(cai)用全送全排的(de)(de)氣流組織形式。同時(shi),要嚴格(ge)控制(zhi)送、排風(feng)的(de)(de)比例以(yi)保證各(ge)實驗(yan)區的(de)(de)壓(ya)力要求(qiu)。
(1)試劑貯存(cun)和準(zhun)備區
該實驗區主要進行的(de)操作為貯(zhu)存試(shi)劑的(de)制備、試(shi)劑的(de)分裝和主反(fan)應混合液的(de)制備。試(shi)劑和用于樣品制作的(de)材料(liao)應直接運(yun)送至該區,不(bu)得經過其他區域。試(shi)劑原材料(liao)必須貯(zhu)存在本區內,并在本區內制備成所需的(de)貯(zhu)存試(shi)劑。對(dui)與氣流壓力的(de)控制,本區應對(dui)外界保持微正壓。
(2)標本制備區
該區(qu)域主(zhu)要進行的(de)操作為(wei)樣本的(de)保存、核(he)酸(RNA、DNA)提取、貯(zhu)存及其加(jia)入至(zhi)擴增反應管和(he)測定(ding)DNA的(de)合(he)成。本區(qu)的(de)壓力梯度(du)要求為:相對(dui)于鄰近區(qu)域(yu)為正壓,以避(bi)免從(cong)鄰近區(qu)進入本區(qu)的(de)氣(qi)(qi)溶(rong)膠(jiao)污(wu)染。另外,由于在(zai)加(jia)樣操作中可能會發生氣(qi)(qi)溶(rong)膠(jiao)所致的(de)污(wu)染,所以應避(bi)免在(zai)本區(qu)內(nei)不必要的(de)走動(dong)。
(3)PCR擴增(zeng)區
該區(qu)域主要(yao)進行的操作(zuo)為DNA擴增(zeng)和擴增(zeng)片段的(de)(de)測(ce)定。此外,已制備(bei)(bei)的(de)(de)DNA模板(來自(zi)樣本(ben)制備(bei)(bei)區(qu)(qu))的(de)(de)加入和主反應混(hun)合液(來自(zi)試劑貯(zhu)存和制備(bei)(bei)區(qu)(qu))制備(bei)(bei)成(cheng)反應混(hun)合液等也可在本(ben)區(qu)(qu)內(nei)進(jin)(jin)行(xing)(xing)。本(ben)區(qu)(qu)的(de)(de)壓力梯(ti)度要求為(wei):相對于(yu)鄰近區(qu)(qu)域為(wei)負壓,以避免氣溶膠從本(ben)區(qu)(qu)漏出。為(wei)避免氣溶膠所(suo)致的(de)(de)污染,應盡量(liang)減少在本(ben)區(qu)(qu)內(nei)的(de)(de)不必要的(de)(de)走動。個(ge)別操(cao)作如加樣等應在超凈臺內(nei)進(jin)(jin)行(xing)(xing)。
(4)PCR產(chan)物分析(xi)區(qu),該(gai)區(qu)域主要(yao)(yao)用(yong)于PCR產(chan)物的電泳、成像及分析(xi),也可以兼容下(xia)游測序(xu)、雜交等實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)。本(ben)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)區(qu)內(nei)樣本(ben)主要(yao)(yao)為(wei)高濃度(du)PCR產(chan)物,氣溶膠濃度(du)極高,污染風險最(zui)大,應嚴格保持負(fu)壓,并且獨立(li)通(tong)風。本(ben)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)所有實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)器具及人員(yuan)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)服需要(yao)(yao)與其他實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)保持隔離,任(ren)何相關(guan)物品只進不出,實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)中(zhong)廢料也應當封存(cun)送(song)出丟棄或清洗(xi)。為(wei)配合電泳需求,該(gai)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)必須配有獨立(li)水源(yuan)及水槽。
2. 分(fen)子(zi)生物實驗(yan)室設計圖范例
(1)常規(gui)4區PCR實驗室設計方案可見下圖:
該方案可(ke)以簡化為三間,將產物分析(xi)區取消,并在遠離此區域的另一件(jian)非分子生物實(shi)驗室中進行(xing)產物分析(xi)實(shi)驗。
(2)在(zai)實驗室分布條件不適(shi)合(he)建立PCR實驗室的時候,可以嘗試將已有潔凈實驗室作為試劑準備區,已有開放實驗室作為樣本制備區和PCR擴增區,并將遠離這兩個區域的有水槽和水源的非核酸實驗室內安放電泳、成像等產物分析設備。
(3)在實驗(yan)(yan)室空(kong)間不富(fu)足的情況下(xia)也可(ke)以通過(guo)分割空(kong)間的方(fang)式以單(dan)間實驗(yan)(yan)室建立分子生(sheng)物實驗(yan)(yan)室,并(bing)同樣在遠離(li)此區域(yu)的另一(yi)件非分子生(sheng)物實驗(yan)(yan)室中進行產物分析實驗(yan)(yan)。參(can)考方(fang)案可(ke)見下(xia)圖:
單(dan)間實驗室(shi)分割方(fang)案1:
單間(jian)實驗室分割方案2:
儀器設備名稱(cheng) | 數(shu)量 | 放置區域(yu) |
冰箱 | 1 | 試劑準(zhun)備(bei)區 |
渦旋混勻儀(yi) | 1 | 試劑(ji)準備區 |
臺(tai)式離心機 | 1 | 樣本(ben)制備(bei)區 |
掌上離心(xin)機 | 1 | 試劑準備區 |
紫外線(xian)消毒車 | 1 | 試劑準備(bei)區 |
潔(jie)凈工作(zuo)臺 | 1 | 試劑準備區 |
移液器 | 1 | 試劑(ji)準(zhun)備(bei)區 |
移液器 | 1 | 試劑準備區 |
移液(ye)器 | 1 | 樣本制備區(qu) |
移(yi)液器 | 1 | 試劑(ji)準備區 |
移液器 | 1 | 試劑準備(bei)區(qu) |
紫外線消(xiao)毒車 | 1 | 樣本制備區 |
臺式離心機 | 1 | 樣本(ben)制備(bei)區 |
掌上(shang)離心機 | 1 | 樣本制(zhi)備區 |
勻漿儀 | 1 | 樣本制(zhi)備區 |
總核(he)酸OD濃(nong)度測(ce)定 | 1 | 樣本(ben)制(zhi)備區 |
冰箱(xiang) | 1 | 樣本(ben)制備(bei)區 |
生(sheng)物安全柜 | 1 | 樣本(ben)制(zhi)備(bei)區 |
渦旋混勻儀 | 1 | 樣本(ben)制備(bei)區 |
PCR板(ban)封膜儀 | 1 | 樣本制備區(qu) |
96孔板(ban)離心機(可選) | 1 | 樣本制備區 |
核酸(suan)提取儀(可選) | 1 | 樣本制備區 |
金屬浴 | 1 | 樣本制備區 |
水浴鍋 | 1 | 樣本制備區 |
移液器 | 1 | 樣本制備區 |
移(yi)液器 | 1 | 樣本(ben)制(zhi)備區 |
移液器(qi) | 1 | 樣本(ben)制備區 |
移液(ye)器 | 1 | 樣本制備區 |
移液器(qi) | 1 | 樣本制(zhi)備區 |
熒光定量PCR儀 | 1 | PCR擴增區 |
普通PCR儀(yi)器 | 1 | PCR擴增區 |
紫外線消毒(du)車 | 1 | PCR擴增(zeng)區 |
移(yi)液器 | 1 | PCR擴增(zeng)區 |
移液器 | 1 | PCR擴增區(qu) |
移液器 | 1 | PCR擴增區 |
移液器 | 1 | PCR擴增區 |
凝膠成像儀 | 1 | 產物分析區 |
電(dian)泳儀 | 1 | 產物分析區 |
電泳(yong)槽 | 1 | 產物分析區 |
脫(tuo)色搖(yao)床(可選(xuan)) | 1 | 產物分析(xi)區(qu) |
微波(bo)爐 | 1 | 產物分析區 |
電子天平 | 1 | 產物分析區 |
移液器 | 1 | 產物分析(xi)區 |
移液(ye)器 | 1 | 產物分析區 |
紫外線消毒(du)車 | 1 | 產物分(fen)析(xi)區 |
超純水 | 試劑準(zhun)備(bei)區&樣(yang)本制備(bei)區 | |
PCR試劑盒 | 試(shi)劑準備區 | |
PCR預(yu)混(hun)液(ye) | 試劑準備(bei)區 | |
96孔PCR板 | 試劑準(zhun)備區(qu) | |
96孔板透明膜 | 試(shi)劑準備(bei)區(qu) | |
八聯管和(he)管蓋 | 試劑準備區 | |
各式槍頭(tou) | 試(shi)劑準備區&樣本制(zhi)備區&產物(wu)分析區 | |
電泳(yong)專用槍頭(可選) | 產物分析(xi)區(qu) | |
EP管(guan) | 試劑準備區&樣(yang)本(ben)制備區 | |
冰盒 | 試劑準備區(qu)&樣本制備區(qu) |